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實驗概要

本實驗介紹了用超速離心沉淀法濃縮與純化慢病毒的操作步驟。

主要試劑

1. 70%乙醇

2. 20%的蔗糖溶液

3. PBS緩沖液

主要設備

1. Ultra-clear SW28離心管

2. 超凈工作臺

3. 紫外燈

4. 10ml移液管

5. Beckman SW28 超速離心轉頭

6. 高速離心機

7. 50ml錐底離心管

8. 低溫冰箱

實驗步驟

1. 取6個Ultra-clear SW28離心管，用70%乙醇消毒后，放在超凈工作臺中打開紫外燈繼續消毒30分鐘。

2. 每個Ultra-clear SW28離心管中加入約32ml的預先處理的病毒上清液。

3. 取一支10ml的移液管，吸取12 ml 20%的蔗糖溶液。將移液管一直插入到離心管的底部，緩慢將蔗糖溶液打出4 ml。同樣地，將剩下8 ml的蔗糖溶液分別加入到另兩個離心管中。另取一支干凈的移液管，對剩下3管進行同樣處理。

4. 用PBS調整各管的重量，使對應的離心管之間的重量相差不超過0.1g。

5. 按次序將所有6個離心管放入Beckman SW28 超速離心轉頭中。

6. 4℃，25，000 rpm. (82，700g) 離心2小時。

7. 小心將管子從轉頭中取出。倒掉上清，將離心管倒扣在紙巾上放置10分鐘使剩余的上清流干。吸掉剩余的液滴。在管底應當有可見的沉淀。

8. 每管中加入100ml 不含鈣和鎂的PBS洗下沉淀。

9. 將SW28超速離心管插入到50ml錐底離心管中，蓋上蓋子。

10. 在4℃溶解2小時，每隔20分鐘輕輕震蕩。

11. 4℃，500g離心1分鐘，使溶液集中于管底。

12. 用200μl 移液器輕柔吹打使沉淀重懸。避免產生泡沫。將所有管中的液體集中到一個SW28離心管中。

13. 集中后的病毒懸液分裝成50μl 每份，保存在成品管中。用碎干冰速凍后儲存在-80 ℃。